正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。
他们合力与恶势力展开斗争……
主演：小林桂树,藤冈弘,石田良子,泷田裕介,二谷英明,村井国夫,夏八木勋,丹波哲郎,罗恩·格林,岛田正吾,约翰·藤冈,中村伸郎,中岛春雄,乔·丹特,苏珊·桑内特,Clifford A. Pellow,菲利普·罗斯,中村哲,麦·安迪,Marvin Miller,中丸忠雄,拉尔夫·詹姆斯,柄本明,早川雄三,石坂浩二,神谷诚,加藤和夫,熊谷卓三,国村隼,草彅刚,神山繁,森干太,名古屋章,尾上克郎,铃木瑞穗,高桥昌也,吉田日出子
